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蛋白質(zhì)測(cè)定儀操作方法粗談

更新時(shí)間：2010-08-17      點(diǎn)擊次數(shù)：2640
蛋白質(zhì)測(cè)定儀操作方法粗談
蛋白質(zhì)測(cè)定儀是用于測(cè)定糧食、食品、乳制品、飲料、飼料、土壤、水等物質(zhì)中氮或者蛋白質(zhì)含量的儀器，因?yàn)樗鶞y(cè)出的物質(zhì)不僅含有蛋白質(zhì)，同時(shí)還含有游離氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸鹽和氨等物質(zhì)，因此該儀器又被稱為粗蛋白測(cè)定儀。
蛋白質(zhì)測(cè)定儀包括兩個(gè)裝置：消化爐和蒸餾裝置，分別用來(lái)消化樣品以及蒸餾和滴定。浙江托普生產(chǎn)的蛋白質(zhì)測(cè)定儀的消化爐有多種孔數(shù)選擇，如4孔、8孔、12孔和20孔，根據(jù)消化爐不同孔數(shù)，我們可以將定氮儀分為不同的型號(hào)。如KDN-04A、KDN-08C等。下面我們具體介紹下蛋白質(zhì)測(cè)定儀在測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)的操作步驟。
消化：稱取經(jīng)粉碎的樣品0.5克（視含氮量而定），放入已洗滌烘干的消化管中，加催化劑5克左右和10ml左右硫酸（如果是固體樣品，在加濃硫酸前先加3ml左右的蒸餾水以濕潤(rùn)樣品，以防止?jié)饬蛩嵊龅綇?qiáng)堿發(fā)生劇烈反應(yīng)）。將消化管放入消化架的各個(gè)孔內(nèi)，然后置于消化爐上，然后開(kāi)啟抽氣三通上自來(lái)水，使抽氣三通處于吸氣狀態(tài)，接通電源開(kāi)始消煮。消化管有不同的孔數(shù)區(qū)別，你可以按照樣品數(shù)的多少來(lái)選擇。每?jī)蓚€(gè)消化爐孔共用一個(gè)進(jìn)出水開(kāi)關(guān)。
蒸餾：（1）打開(kāi)電源，儀器自動(dòng)進(jìn)入加水狀態(tài)，待加水工作完成后會(huì)自動(dòng)停止。（2）在左邊托盤(pán)放上空的消化管，右邊放上空的三角瓶，打開(kāi)水開(kāi)關(guān)。為排空管路內(nèi)空氣，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先按下加酸鍵，待液體流順暢后停止加酸；加堿同樣操作。按下蒸餾鍵，儀器開(kāi)始進(jìn)入蒸餾狀態(tài)，待蒸氣自動(dòng)從噴射管中噴出并穩(wěn)定后，關(guān)閉開(kāi)關(guān)。在左邊托盤(pán)放上已消化冷卻好的樣品，右邊托盤(pán)放上250ml三角瓶，并使管口碰到杯底。再打開(kāi)電源，依次按加酸、加堿、蒸餾鍵對(duì)樣品進(jìn)行蒸餾（加酸、加堿量設(shè)定自行）。蒸餾完畢后，將三角瓶下移，使接收管離開(kāi)液面，用水沖洗出氣口，繼續(xù)蒸餾半分鐘后，取下三角瓶待滴定用。第二個(gè)樣品同上方法。（3）關(guān)開(kāi)關(guān)，關(guān)水，取下消化管，打開(kāi)側(cè)面排水夾子，把連堿泵的膠管放入蒸餾水容器內(nèi)，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)用手按加堿按鍵抽蒸餾水清洗堿泵，酸泵同樣清洗，zui后關(guān)電結(jié)束。
滴定：用0.1 NHCL滴定接收瓶?jī)?nèi)的溶液，滴定至粉紅色時(shí)為止，記下消耗HCL的毫升數(shù)，按下列式子計(jì)算蛋白含量：
蛋白質(zhì)%＝
式中：X—樣品中蛋白質(zhì)的含量，%
      V1—樣品消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ml；
      V2—試劑空白消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ml；
      N—硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃度；
      0.014—1N硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml相當(dāng)于氮克數(shù)；
      m—樣品的質(zhì)量（體積），g（ml）；
      F—蛋白質(zhì)系數(shù)，按16%計(jì)算乘以6.25即為蛋白質(zhì)。
 （空白測(cè)定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測(cè)定）
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